我院检验科引进新技术--实时荧光定量PCR仪

来源:   发布日期: 2012-01-16 16:20:00
 新科学技术是医院发展和保持高水平的不竭源泉。本月,我院检验科成功引进厦门安普利生物工程有限公司生产的实时荧光定量PCR仪。PCR检测技术是一种病因学检测,取材方便、简便快速,整个过程仅需2个小时左右,可以做到当天取材,当天检测,当天出结果,有利于疾病的早期诊断和治疗。
    1、PCR(Polymerase Chain Reaction):聚合酶链式反应,在体外模拟细胞内DNA的复制机制,可以在1个小时内将目的基因片段扩增上百万倍,从而大大提高对DNA的分析和检测能力,理论上可以扩增仅含1个靶DNA分子的样本。
    2、实时荧光定量(Real-time fluorescence quantitative):在PCR反应体系中加入荧光基团,通过荧光染料或荧光探针对扩增产物进行标记,采用实时监测法对未知模板进行定量分析。
荧光染料SYBR Green I只和双链DNA结合,不与单链DNA、RNA结合。与DNA双链结合后发出很强的荧光信号,游离的SYBR Green I仅产生非常弱的荧光信号。
    3、扩增曲线与标准曲线:阳性标本的PCR典型扩增曲线为一条平滑的“S”型曲线(以循环数为横坐标,实时荧光强度为纵坐标)。荧光阈值一般设置为第2-8个循环荧光信号强度标准偏差的10倍;CT值为扩增产物的荧光信号达到阈值时所经过的扩增循环次数;通过已知起始拷贝数的标准品可做出标准曲线,根据CT值和标准曲线对起始模板进行定量分析。

    模板起始浓度越高,荧光信号强度达到阈值所需的循环数越少,即Ct值越小;模板起始浓度的常用对数与Ct值呈负线性关系,根据样品Ct值,就可以计算出样品中所含的模板量。
    与常规PCR相比,本技术灵敏度高、特异性强、简便快捷、定量范围广,可用于以下项目的检测:乙肝病毒DNA、丙肝病毒RNA、结合杆菌DNA、淋球菌DNA、沙眼衣原体DNA、解脲支原体DNA、单纯疱疹病毒DNA、人乳头瘤病毒DNA、梅毒螺旋体DNA、人巨细胞病毒DNA、弓形体DNA、风疹病毒RNA、EB病毒DNA、肺炎支原体DNA等。
目前,我院检验科只开展乙肝病毒DNA和丙肝病毒RNA两项的检测,日后将根据临床需要进行增减必要项目。相信该项目的开展将显著提高我院临床诊疗水平,增强医院综合实力。

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